Холера, которую вызывает холерный вибрион, входит в список самых опасных болезней человечества. Она известна издревле, протекает в виде эпидемий и уносит миллионы жизней. Очагом холеры была Индия – идеальный по температуре и влажности для бактерии Vibriocholera климат. Специфика региона – высокая плотность населения при низкой санитарно-гигиенической культуре, загрязнении водоемов фекалиями, использовании инфицированной воды в пищу – объясняет факт развития инфекции в данном месте. Как и другие инфекционные болезни, холеру изучают микробиологическими методами.

История обнаружения микроба

Холера с древних времен известна человечеству. Ее упоминал в своих работах Гиппократ, а первое научное описание эпидемии холеры сделал португальский врач Гарсиа дель Хуэрто в 1563 г. (Индия, Гоа).

В 1885 г. Кох выделил чистую культуру бактерии Vibriocholera. И хотя Хуэрто еще в 1563 г. описал холеру как болезнь, только с появлением микроскопов появилась возможность выявить возбудитель. Микробиологические исследования показали, что возбудителями холеры являются микроорганизмы в форме изогнутой палочки, получившие название «холерный вибрион». В 1870 г. Луи Пастер подтвердил влияние ослабленных бактерий на формирование иммунитета на примере эксперимента с куриной холерой. Это подтолкнуло его к открытию способа получения вакцин.

Возбудитель холеры: виды и значения

С развитием микробиологии ученые выявили причину холеры. Ею оказался микроорганизм, согласно принятой классификации, относящийся к царству прокариотов, типу Протеобактерий, порядку Vibrionales, семейству Vibrionaceae, роду Vibrio и виду Vibriocholera – холерный вибрион.

Холерный вибрион (латинское название Vibriocholera) – слабоизогнутая грамотрицательная палочка с выраженным полиморфизмом, определяющим ее морфологическую изменчивость. Бактерия очень подвижна (монотрих), не образует споры и капсулы. Возбудитель холеры относится к группе хемоорганогетеротрофов и является факультативным анаэробом.

Бактерия холеры имеет термолабильный О- и термостабильный жгутиковый Н-антигены. О-антигены по особенностям строения подразделяют на 140 серогрупп. Среди всех V.cholerae только вибрионы серогрупп О1 и О139 вызывают холеру. Бактерии, входящие в другие серогруппы, являются условнопатогенными (О2, О3 и О4 вызывают гастроэнтериты и энтериты) или непатогенными.

По разновидности штаммов бактерий, входящих в О1, биовары подразделяют на:

• классическую холеру с типичным протеканием заболевания;
• биотип холерного вибриона Эль-Тор, для которого характерно легкое и нетипичное протекание болезни.

Биотипы серогруппы О1 по наличию в составе фракций А, В и С разделяют на три серовара (серотипа):

• Огава содержит фракцию В;
• Инаби– фракцию С;
• Хикодзима – носитель фракций А, В и С.

Серовар Хикодзима не является общепризнанным, и его наличие оспаривается рядом ученых. Термостабильный Н-антиген (жгутиковый) вибрионов холеры является общим для всех серотипов. Бактерии холеры, входящие в серогруппы non О1, способны вызвать диарею различной тяжести, вплоть до летального исхода.

Строение

Морфология холерного вибриона описывает строение и форму бактерии. Бактерия Vibriocholera под микроскопом выглядит как прямая или изогнутая палочка с одним жгутиком, длина которого значительно превышает размеры самого вибриона (1,5/4 х 0,2/04 мкм). В стационарной фазе роста (старая культура) вибрион имеет инволюционные формы:

• нитевидные;
• спиралевидные;
• колбовидные;
• кокковидные.

При воздействии пенициллина бактерия образует фильтрующиеся формы. На свежих средах, при пересеве, Vibriocholera возвращается к первоначальному виду изогнутой палочки.

Жизненный цикл и питание

Возбудитель холеры относят к факультативным анаэробам, но лучший рост бактерий происходит при аэробных условиях. По типу питания бактерию Vibriocholera относят к хемоорганотрофам с типичными окислительными и бродильными типами метаболизма. Хемотрофы получают энергию из окислительно-восстановительных (ОВ) процессов и, как многие другие патогенные микроорганизмы, не зависят от солнечной энергии. Холерный вибрион является факультативным анаэробом, то есть процессы окисления-восстановления происходят без участия кислорода по типу брожения.

Органотрофы в ОВ-реакциях взаимодействуют с органическими соединениями, расщепляя их на более простые и устойчивые соединения. Чаще всего донорами в ОВ-процессах являются сахара, жиры и аминокислоты. В пищевой цепочке возбудитель холеры является консументом – он использует уже готовые органические соединения, но не способен разложить их до простейших неорганических составляющих.

Гетеротрофы, к которым относится бактерия холеры, получает необходимый для жизнедеятельности клетки углерод из имеющихся органических соединений. Она не способна усваивать его из углекислого газа. Все гетеротрофы делятся на такие группы:

• симбионты – взаимовыгодно сосуществующие с другим видом;
• паразиты – бактерии, к которым относится холерный вибрион, живущие за счет хозяина и приносящие ему вред;
• сапрофиты – микроорганизмы, использующие для питания мертвую органику.

Путь вибриона в организме

Бактерии холеры попадают в организм человека из окружающей среды вместе с водой и пищей. В желудке большая часть микроорганизмов погибает под воздействием соляной кислоты. Возбудители холеры, преодолевшие кислотный барьер желудка, проникают в тонкий кишечник. Щелочная среда кишечника благоприятна для жизнедеятельности вибрионов. Микроорганизмы прикрепляются к слизистой оболочке кишечника. Вибрион не проникает внутрь клеток кишечника – он остается снаружи.

В процессе жизнедеятельности холерные вибрионы выделяют специфический токсин СТХ, взаимодействие которого с клеточной оболочкой вызывает функциональные нарушения. Внутри клетки происходит нарушение обмена таких веществ, как натрий и хлор, следствием чего является выделение растворенных солей в просвет кишечника и быстрое обезвоживание организма. Обезвоженные клетки слизистой кишечника быстро погибают и выводятся из организма вместе с бактериями – возбудителями заболевания.

Биохимические свойства

Возбудитель холеры обладает высокой биохимической активностью. Сахаролитические свойства:

• сбраживают глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит до кислоты;
• не окисляют арабинозу, инулин, инозит.

Отношение к сахарам является критерием для деления вибрионов на 6 групп. Для определения сахаролитической активности применяется «триада Хейберга» – сахароза, манноза и арабиноза. Истинные возбудители холеры относятся только к первой группе, окисляющей маннозу и сахарозу, и инертные к арабинозе. В другие пять групп входят нехолерные вибрионы.

• разжижают желатин;
• вызывают свертываемость плазмы крови кролика;
• гидролизуют казеин;
• разжижают свернувшееся молоко;
• расщепляют белковые соединения до аммиака и индола;
• нитраты восстанавливают в нитриты;
• не образуют сероводород.

Холерный вибрион продуцирует оксидазу, которая является катализатором ОВ-процессов в клетке.

Устойчивость

Для бактерии Vibriocholerae окружающая среда не является благоприятной – воздействие прямых солнечных лучей или высушивание для микроорганизма губительно. Высокие температуры возбудитель холеры тоже не переносит:

• при 60°С он погибает в течение 5 минут;
• при 100°С практически мгновенно.

Низкие температуры и замораживание для холерного вибриона не критичны, он способен несколько дней сохранять свою жизнеспособность даже вмороженным в лед. Кислая среда для бактерии холеры губительна. В растворе серной кислоты даже крайне разбавленной концентрации (1:10000) вибрион холеры погибает за несколько секунд. Щелочная среда (как в кишечнике, где микроорганизмы обитают) и высокие концентрации солей для Vibriocholerae являются вполне благоприятными.

Антигенная структура

Вибрион холеры содержит 2 антигена:

• Н – жгутиковый термолабильный, неспецифический, общий для всех вибрионов;
• О – соматический термостабильный, обладает видовой специфичностью, делит вибрионы на 140 серогрупп. Так, биовары Vibriocholerae классической холеры и биотип Эль-тор относятся к подгруппе О1.

Подгруппа О1, в зависимости от входящей в состав фракции А, И и С, делится на 3 серовара:

У носителей и больных обнаружили подобные холерному вибриону формы, не обладающие антигенами О и Н. Их назвали НАГ-вибрионами, и достаточно часто выделяют из различных объектов окружающей среды, в частности, из воды.

Патогенность

Холерный вибрион попадает в организм человека и в большей части гибнет в желудке с его кислой средой. Вибрионы, проскочившие желудок, попадают в тонкий кишечник, где среда щелочная. В нем бактерии холеры проникают через слизистую оболочку стенок и прикрепляются к энтероцитам.

Основной фактор патогенности бактерии холеры – это секреция белковых эндо- и экзотоксинов. К экзотоксинам относится холероген, состоящий из двух субъединиц (А и В) и являющийся функциональным блокатором. Субъединица А является источником токсических свойств. Она провоцирует выработку аденилатциклазы, что приводит к нарушению водно-солевого баланса, выведению солей натрия и хлора и быстрому обезвоживанию организма больного. Субъединица В вырабатывает эндотоксин, который входит в состав клеточной стенки и защищает вибрион холеры от фагоцитов.

Тинкториальные свойства холерного вибриона

Являясь грамотрицательными микроорганизмами, бактерии холеры окрашиваются по Граму в красный цвет.

Токсины

В процессе жизнедеятельности холерный вибрион продуцирует два вида токсинов:

• экзотоксин холероген, обладает ярко выраженным энтеротоксическим действием;
• эндотоксин.

Возбудители холеры в организме человека продуцируют фибринолизин, коллагеназу, лерициназу, муциназу, нейраминедазу, которые называют ферментами агрессии.

Выращивание и лабораторная диагностика

Вибрионы Vibriocholera являются факультативными анаэробами, они хорошо растут на щелочных средах с pH от 7,3 до 8,7.

1. Плотные среды. При культивировании холерных вибрионов на плотных средах получаются дискообразные колонии с ровными краями, почти прозрачные, с легким голубым оттенком.
2. Желатин. Выращенные на желатине вибрионы формируют зернистые прозрачные колонии, под микроскопом напоминают битые стекла.
3. Щелочной бульон. На пептонной воде и щелочном бульоне выращивают холерный вибрион в виде пленки. Бактерии Vibriocholera вызывают острую карантинную инфекцию, и требования к забору материала для лабораторных исследований учитывают возможную высокую заразность образцов. С учетом этого бактериологические исследования образцов с подозрением на холеру следует проводить только в режимных лабораториях, укомплектованных специально обученным персоналом.

Лабораторная диагностика образцов проводится следующими методами:

• бактериоскопический;
• бактериологический;
• серологический.

Бактериологические исследования проводят поэтапно, с максимально короткими интервалами между анализами. Данные исследования проводятся в режиме круглосуточной работы.

1. Этап 1. Делается посев исследуемого материала на пептонной воде 1%; пептонной воде 1% с теллуритом калия; щелочном МПА; селективной среде.
2. Этап 2. Спустя 7-8 ч. после посева изучают рост микроорганизмов образца. Интенсивно растущие в щелочной среде холерные вибрионы опережают сопутствующую микрофлору и образуют на поверхности нежно-голубую прозрачную пленку. Полученную пленку, для дальнейшего накопления микроорганизмов, засевают на пептонную воду 1% и щелочной агар. Также проводят реакцию с диагностической сывороткой.
3. Этап 3. Посевы выдерживают в термостатах 12-14 ч. С полученными микроорганизмами проводят реакцию агглютинации с использованием О-сыворотки. При положительном результате полученный материал высевают на среду (чаще всего полиуглеводную), содержащую 2-3 сахара для получения чистой культуры. На этом этапе, спустя 48 ч. с момента получения образца для исследования, выдается ответ о наличии вибриона холеры в исследуемом образце.
4. Этап 4. Материал термостатируется в течении 12-14 ч. За счет расщепления сахаров цвет столбика изменяется. Проводят идентификацию культуры по характерным морфологическим, антигенным и другим свойствам. На данном этапе проводят дифференциацию классической холеры и Эль-Тора. Для чего используют рот-тест, пестрый ряд Гисса, реакцию Фогеса-Проскауэра, гексминовый тест и другие специфические методики. Спустя 60 ч. после начала исследований определяется вирулентность изучаемых образцов.

1. Реакция агглютинации культуры холерного вибриона, выращенной на агаре в течение 5 часов, и сыворотки больного.
2. Применение ИФА-методов для обнаружения копроантител.

Существуют ускоренные методы, к которым относятся:

• исследование реакций микроагглютинации и иммобилизации вибрионов с противохолерной О-сывороткой на фазовоконтрастном микроскопе;
• иммунофлюоресцентный метод;
• ПЦР-диагностика.

Эпидемиология

Холерный вибрион вызывает острую кишечную инфекцию, а единственным источником инфекции в природе может быть только больной человек или бактерионоситель. Животные не болеют холерой, а при искусственном заражении сразу погибают.

При биоваре холеры Эль-Тор возможно продолжительное вибрионосительство, кроме того, заболевание протекает по атипическим формам, затрудняя своевременную диагностику и способствуя распространению инфекции.

Инфекция может попадать в организм человека по следующим путям заражения:

• водный – при употреблении или использовании в хозяйственных целях инфицированной воды;
• пищевой – с инфицированными продуктами (молоко, моллюски, рыба);
• контактный – через предметы или прямой контакт с больным;
• смешанный – представляет сочетание предыдущих путей заражения.

Заразиться холерой воздушно-капельным путем через органы дыхания маловероятно.

Особенности болезни

Заболевание относится к особо опасным заболеваниям с высокой восприимчивостью. Чаще всего распространяется в форме эпидемий. Скрытый (инкубационный) период может длиться от нескольких часов до 5 суток. У человека заболевание может протекать от стертой до тяжелой формы с летальным исходом через сутки-двое.

До 80% случаев инфицирования холерным вибрионом протекает как заболевание легкой или средней степени тяжести, сопровождающееся диареей. Возбудитель заболевания, попав в организм человека через рот, локализуются в организме больного на поверхности ворсинок тонкого кишечника, в просвете кишечника.

Симптомы холеры

Независимо от степени тяжести заболевания, холера обладает двумя выраженными симптомами:

1. Диарея. Под воздействием эндотоксина холерного вибриона происходит отек слизистой оболочки кишечника. Нарушается водно-солевой баланс, и организм начинает выделять жидкость и растворы солей. Это приводит к быстрому обезвоживанию организма.
2. Рвота. Выделяемая тонким кишечником жидкость и растворы солей поднимаются по ЖКТ вверх и удаляются через рот.

Группа риска

Наиболее подвержены инфицированию следующие категории людей:

• имеющие низкую кислотность желудка;
• зараженные глистами;
• после резекции желудка;
• с ослабленной иммунной системой;
• с анемией;
• алкоголики.

Осложнения

При поражении холерным вибрионом наблюдаются два вида осложнений, связанные с потерей организмом жидкостей и минералов:

К неспецифическим относят пневмонии, флегмону, сепсис, рожу и абсцессы. Специфические осложнения связаны с патологиями тонкого кишечника на фоне потери жидкости – часто это дифтерический колит. Возможны увеличение селезенки, тромбоз междольковых сосудов печени, некроз эпителия почечных канальцев, постхолерная уремия и другие.

Лечение

Лечебные мероприятия в первую очередь направлены на восполнение и восстановление водно-солевого баланса. Регидратация проводится внутривенно струйно, далее капельно. Вводят раствор хлорида и гидрокарбоната натрия в бидистилляте.

Совместно с регидратационной терапией применяют антибиотики – олететрин, тетрациклин, эритромицин, левомицетин. Применяются сульфаниламидные препараты, витамины группы В, С и РР. Благодаря использованию комплексного лечения летальность холеры на сегодняшний день составляет около 1%.

Иммунитет у переболевших

После перенесения инфекции стойкий иммунитет при холере не создается. Повторное заражение возможно, а эффективную вакцину создать пока не удается.

Прогноз и профилактика

Инфекция опасна обезвоживанием организма, но при своевременном и эффективном лечении прогноз благоприятный. Учитывая орально-фекальный путь заражения холерой, меры профилактики имеют санитарно-гигиеническую направленность. В неблагоприятных районах рекомендуется регулярно мыть руки, овощи и фрукты ошпаривать кипятком, не покупать продукты у случайных лиц, не купаться в открытых водоемах.

В России последний единичный случай заболевания был зафиксирован в 2008 г. Своей холеры в стране нет, но всегда есть угроза завезти инфекцию из других стран.

Имею два образования: техническое и экономическое. Также интересуюсь воспитанием детей, медициной, женскими темами, путешествиями, психологией, а также дизайном и ремонтом.

Таксономия. Возбудитель холеры – холерный вибрион Vibrio cholerae относится к отделу Gracilicutes, семейству Vibrionaceae, роду Vibrio. Внутри вида Vibrio cholerae различают два биовара: biovar cholerae classic (выделенный Р. Кохом) и biovar eltor (открытый супругами Готшлих).

Морфологические и тинкториальные свойства. Это небольшие (2-4 х 0,5 мкм) изогнутые в виде запятой грамотрицательные палочки, очень полиморфные, не образуют спор, капсул. Монотрихи, обладают высокой подвижностью, что является важным диагностическим признаком.

Культуральные свойства. Холерный вибрион – факультативный анаэроб, предпочитающий аэробные условия и быстро погибающий в анаэробных. К питательным средам неприхотлив. Щелочелюбив. Элективными для холерного вибриона являются 1% щелочная пептонная вода (ПВ), щелочной агар. Оптимальная температура для роста 37°.

На 1% ПВ (рН=8,5-9,0) холерный вибрион опережает в росте бактерии кишечной группы и образует через 6-8 часов нежную голубоватую пленку. На плотной среде через 12-14 часов образует мелкие голубоватые колонии.

Биохимические свойства хорошо выражены.

Сахаролитические свойства. Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты многие углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, лактозу, гликоген, крахмал и др.).

При идентификации возбудителя наиболее важным является определение ферментации маннозы, арабинозы и сахарозы. По способности разлагать эти 3 углевода Хейберг все вибрионы семейства Vibrionaceae разделил на 8 групп.

Холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к I группе Хейберга.

Протеолитические свойства. Холерные вибрионы разжижают желатин, свертывают молоко, расщепляют белки до NH₃ и индола. H₂S не образуют. Восстанавливают нитраты в нитриты образуют оксидазу.

Антигенная структура. Холерные вибрионы имеют термостабильные О- и термолабильные Н-антигены.

По структуре О-антигенов выделяют более 150 серогрупп. Возбудителя холеры относят к 01 и 0-139 серогруппам, все другие представители вида V. сholerae не являются возбудителями холеры, но могут вызывать другие заболевания (например, гастроэнтериты).

О-антиген 01 группы холерных вибрионов не однороден и состоит из А, В, С компонентов. В зависимости от их сочетания различают 3 серовара возбудителя холеры: Огава (А, В), Инаба (А, С), Гикошима (А, В, С).

Н-антиген неспецифичен для V. сholerae, является общим для вего рода Vibrio.

Факторы патогенности. Основной фактор патогенности – способность к токсинообразованию. Холерные вибрионы образуют эндо- и экзотоксин.

Эндотоксин – термостабильный липополисахарид с иммуногенными свойствами (индуцирует синтез вибриоцидных антител), но в патогенезе существенной роли не играет.

Экзотоксин – термолабильный белок, состоящий из нескольких фракций, наиболее важной из которых является холероген. Молекула холерогена включает 2 компонента: А и Б. Компонент Б взаимодействует с рецепторами эпителия тонкой кишки, облегчая проникновение в клетку компонента А. Компонент А активирует фермент аденилатциклазу и усиливает синтез циклических аденозинмонофосфатов (цАМФ), что приводит к гиперсекреции энтероцитами воды и солей в просвет кишечника и к диарее.

Холерные вибрионы секретируют также экзотоксины, аналогичные токсинам токсигенных эшерихий, шигелл, сальмонелл, в частности, экзотоксины с цитотоксическим действием, вызывающим гибель клеток эпителия тонкой кишки.

Возбудители холеры продуцируют ферменты агрессии – фибринолизин, плазмокоагулазу, лецитиназу, нейраминидазу, коллагеназу, гиалуронидазу

Патогенность связана так же с подвижностью вибриона, ферментом муциназой (разжижающей слизь и обеспечивающей проникновение возбудителя к поверхности эпителия) и с адгезивными свойствами: белки наружной мембраны способствуют прикреплению вибрионов к эпителиоцитам, обеспечивая им возможность размножаться и не быть выведенными из организма человека.

Резистентность относительно невысока. При 60° погибают в течение 5 минут, при кипячении – мгновенно. Общепринятые концентрации дезинфицирующих веществ убивают их быстро. Очень чувствительны к кислотам, высаливанию, солнечному свету

Однако низкие температуры переносят хорошо: во льду сохраняются несколько месяцев, в испражнениях, почве, воде – от нескольких недель до 2-3 месяцев.

Более устойчив во внешней среде холерный вибрион Эль-Тор.

Патогенность для животных. В естественных условиях животные не болеют холерой.

Эпидемиология. Источник инфекции – больной или вибрионоситель. Механизм передачи- фекально-оральный. Пути передачи — водный(основной), пищевой, контактно-бытовой.

Факторы передачи – загрязненные выделениями больного руки, предметы обихода, вода, пищевые продукты, мухи. Установлено, что возбудитель холеры Эль-Тор способен размножаться в организме рыб, ракообразных, простейших, в сине-зеленых водорослях и других обитателях водоемов. На этом основании сделано заключение о сапронозном характере инфекции, и возможности инфицирования при употреблении в пищу сырых или термически недостаточно обработанных морских и речных продуктов.

В настоящее время наиболее распространена холера, вызываемая возбудителем Эль-Тор.

Заболевание чаще отмечается в теплое время года. Восприимчивость к инфекции высокая, однако важное значение имеет состояние кислотности желудка и другие факторы неспецифической резистентности.

С 1817г зарегистрировано 7 пандемий холеры.

Патогенез. Заражение происходит перорально. Большинство вибрионов гибнет в кислой среде желудка. Однако при снижении желудочной секреции (как функциональном разбавление желудочного содержимого водой, пищей так и патологическом например, гастрит со сниженной кислотностью) вибрионы проходят через желудок, попадают в тонкую кишку, где прикрепляются к энтероцитам, размножаются и поражают их ферментные системы без развития воспалительного процесса.

Ведущую роль в патогенезе играет холероген, который нарушает водно-солевой обмен, приводит к резкому обезвоживанию организма и ацидозу.

Клиника. Инкубационный период от нескольких часов до 5 суток. Заболевание начинается остро, часто внезапно, в ночные или утренние часы с безболезненного поноса и редко (в 10-20% случаев) – повышения температуры.

Частота дефекации быстро нарастает до 10 и более раз в сутки. Испражнения не имеют зловонного запаха и в 20-40% случаев приобретают вид рисового отвара. При холере боли в животе не характерны.

Первая стадия – холерный энтерит, характеризуется диареей с частотой дефекациине более 10раз в сутки, продолжается 1-3 дня. На этой начальной стадии заболевание может закончиться (легкая форма холеры) или перейти в следующую стадию – стадию гастроэнтерита (форма средней тяжести). На этой стадии к поносу присоединяется повторная рвота без чувства тошноты. Больной теряет до 30 литров жидкости в сутки.

Заболевание может перейти в III стадию (тяжелая форма холеры) – холерный алгид, характерным признаком которого является снижение температуры до 34°. Меняется внешний вид больного: черты лица заостряются, глаза западают, появляются темные круги под глазами (симптом «очков»), кожа кистей сморщивается («руки прачки»), живот втянут, голос пропадает (афония).

Появляется тахикардия, кровяное давление падает, уменьшается количество мочи (олигурия) вплоть до анурии.

В алгидной стадии при отсутствии лечения летальность достигает 60%.

Иммунитет непрочный и непродолжительный. Нередко отмечают случаи повторного заражения.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования являются испражнения рвотные массы, желчь, пищевые продукты, вода, секционный материал, смывы с объектов внешней среды, гидробионты, мухи и др.

Основным в лабораторной диагностике холеры является бактериологический метод.

Материал засевают на элективные среды – щелочную пептонную воду и щелочной питательный агар. Чистую культуру идентифицируют по морфологическим культуральным, биохимическим свойствам, чувствительности к холерному фагу, агглютинабельности противохолерной О-сывороткой и типовыми агглютинирующими сыворотками Инаба и Огава.

При идентификации чистой культуры определяют ее гемолитические свойства (классический холерный вибрион не вызывает гемолиза бараньих эритроцитов, а биовар Эль-Тор может их гемолизировать); способность агглютинировать куриные эритроциты (классический холерный вибрион не агглютинирует их в отличие от биовара Эль-Тор); чувствительность к полимиксину (классической холерный вибрион чувствителен к полимиксину, биовар Эль-Тор – нет).

В настоящее время существует мнение о нецелесообразности проведения бактериоскопии мазков и препаратов методом «висячая» капля из нативного материала, хотя ранее бактериоскопический метод использовался как ориентировочный в диагностике холеры.

Серологическое исследование является вспомогательным и применяется для ретроспективной диагностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки иммунитета. Определяют агглютинины (в реакции агглютинации и РНГА); вибриоцидные антитела (в реакции лизиса) и антитоксины.

К экспресс-методам диагностики холеры относятся:

1. Иммобилизация вибрионов противохолерными сыворотками и типовыми холерными фагами.

После обработки исследуемого материала указанными сыворотками и фагами в препарате «раздавленная» капля при наличии холерного вибриона через 3-5 минут наблюдается прекращение их движения.

2. Иммунофлюоресцентный метод.

Препараты из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе. В положительном случае в препарате наблюдается яркое желто-зеленое свечение в виде блестящего ободка по периферии клетки.

3. Метод микроагглютинации нативного материала.

Реакция ставится на стекле с использованием холерной О-сыворотки. При наличии в нативном материале вибрионов через 5-10 минут в капле с сывороткой выпадают хлопья.

4.Определение антигена возбудителя в исследуемом материале с помощью ДНК-зондов.

Препараты для лечения и профилактики. Терапия предусматривает восполнение жидкости и электролитов плазмозамещающими жидкостями (глюкозосолевыми растворами). Проводят антибактериальную терапию препаратами тетрациклинового ряда, левомицетином, фторхинолонами.

Главные профилактические мероприятия – неспецифические санитарно-гигиенические и карантинные.

Для специфической иммунопрофилактики имеются:

1) убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба;

2) холероген – анатоксин;

3) бивалентная вакцина из анатоксина и О-антигена Огава и Инаба.

Эффективность вакцинации не превышает 60-70%. Невосприимчивость после их применения сохраняется в течение 3-6 месяцев, поэтому вакцинопрофилактика имеет вспомогательное значение и применяют ее по эпидемическим показаниям.

В очагах холеры хороший профилактический эффект дает прием тетрациклина.

Для лечебно-профилактических целей используется поливалентный холерный бактериофаг.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студентов недели бывают четные, нечетные и зачетные. 9354 — | 7420 — или читать все.

91.146.8.87 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

Холера – особо опасная инфекционная болезнь, с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом передачи возбудителя, водным, пищевым и контактно-бытовым путями распространения инфекции.

Холерные вибрионы относятся к сем. Vibrionaceae, роду Vibrio, виду Vibrio cholerae, который включает как патогенные, способные вызывать заболевания, склонные к эпидемическому и пандемическому распространению, так и свободноживущие в воде вибрионы, безопасные для человека или обусловливающие спорадические случаи диарей и инфекций с внекишечной локализацией возбудителя.

Холерные вибрионы грамотрицательные, аспорогенные полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки, варьирующие в размерах (0,2-0,6 мкм в ширину и 1,5-3,0 мкм в длину), с одним полярно расположенным жгутиком, благодаря которому очень подвижны.

Холерные вибрионы хорошо растут на щелочных питательных средах pH 7,6-8,6, содержащих до 2% NaCl. Оптимальная температура выращивания — 35-38 ºC. На щелочных жидких питательных средах — мясо-пептонном бульоне (МПБ) и 1% пептонной воде (ПВ) — через 6-8 ч инкубирования при 37 ºC наблюдается образование нежной пленки на поверхности и легкое помутнение среды. На пластинках щелочного мясо-петонного агара (МПА) холерные вибрионы в типичной S-форме через 18-24 ч выращивания образуют гладкие, прозрачные, влажные с ровным краем колонии, диаметром 2-3 мм. Могут встречаться атипичные колонии – шероховатые, мутные, пигментированные (коричневые или желтые), коккоподобные. На элективной среде TCBS на зеленом фоне среды колонии вибрионов круглые, гладкие с ровным краем, плоские, желтого цвета. При более длительной инкубации желтый цвет колоний часто переходит в зеленый цвет.

Холерные вибрионы, как и другие представители рода Vibrio, продуцируют индофенолоксидазу, ферментируют до кислоты без газа глюкозу в аэробных и анаэробных условиях, декарбоксилируют лизин и орнитин, не обладают дигидролазой аргинина. Холерные вибрионы относятся к 1 ферментативной группе по Хейбергу: расщепляют до кислоты сахарозу и маннозу и не разлагают арабинозу. Отношение к лактозе непостоянное. Вибрионы разжижают желатину, казеин, фибрин; вырабатывают лецитиназу, липазу, нейраминидазу, хитиназу, пенициллиназу.

V.cholerae по наличию специфического O-антигена распределяются на серологические группы, их более 200. Возбудителями холеры являются холерные вибрионы O1 и O139 серологических групп. Холерные вибрионы других не O1/не O139 серологических групп могут вызывать спорадические или групповые случаи диарей, не склонные к эпидемическому распространению.

Холерные вибрионы, относящиеся к О1 серогруппе делятся на три серовара — Огава, Инаба, Гикошима. Принадлежность культур к V. cholerae О1 серогруппе устанавливают по результам агглютинации видоспецифической холерной сывороткой О1. Вариантоспецифические холерные сыворотки Огава и Инаба позволяют определить соответственно серовар культуры. Холерные вибрионы, реагирующие в одинаковых титрах с сыворотками обоих вариантов – Инаба и Огава, относятся к серовару Гикошима. Типичные штаммы холерных вибрионов в S-форме агглютинируются видо- и вариантоспецифической сывороткой не меньше, чем до 1/2 титра. Культуры в R-форме взаимодействуют с холерной RO-сывороткой, при этом агглютинация с видоспецифической холерной сывороткой О1 серогруппы снижена или отсутствует совсем.

Холерные вибрионы в пределах O1 серогруппы делятся на два биовара: классический и эльтор, имеющие существенные фенотипические и генетические отличия.

При выделении атипичных культур проводят дополнительные исследования. Штаммы, агглютинирующиеся диагностическими сыворотками О1, RО, Инаба (Огава) ниже 1/2 титра или агглютинирующиеся только RО сывороткой, с полной или частичной утратой способности лизироваться диагностическими холерными бактериофагами, изучают в тестах, определяющих их принадлежность к роду Vibrio (табл. 14). Слабоагглютинирующиеся холерной О1 сывороткой и фагорезистентные культуры исследуют также в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), флюоресцентно-серологическим методом (МФА), реакцией иммобилизации вибрионов (РИВ) или адсорбцией по Кастеллани. Культуру, агглютинирующуюся сывороткой О139, относят к холерным вибрионам О139 серогруппы.

Если культура не агглютинируется холерными сыворотками О1, О139, но по совокупности признаков относится к виду холерных вибрионов, ее изучают в реакции агглютинации с набором диагностических холерных сывороток О2-О83 серогрупп по отечественной классификации. Кроме того, штаммы V. cholerae не О1/О139 серогрупп типируют бактериофагами диагностическими холерными ТЭПВ 1-7. Энтеропатогенные холерные вибрионы не О1 группы относятся преимущественно к О2, О5, О6, О8, О9, О14, О17, О22, О24, О28, О34, О36, О41, О42, О47, О5О серогруппам и, как правило, лизируются фагами ТЭПВ 1, 4, 7.

Основные дифференциальные признаки рода Vibrio

и некоторых других микроорганизмов

Признаки	Роды сем. Vibrionaceae	Enterobacteriaceae	Pseudomonadaceae
Vibrio	Aero-monas	Enhydrobacter	Plesiomonas	Photobacterium
V.cholerae	другие виды
Окраска по Граму, морфология	Грамотрицательные полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки
Подвижность	+	+(–)	+(–)	–	+	+	+(–)	+
Оксидаза	+	+(–)	+	+	+	+(–)	–	+(–)
Рост на средах без NaCl	+	– (+)	+	+	+	–	–	–
Чувствительность к 0- 129 1)	+	+(–)	–	–	+	+	–	–
О/Ф глюкозы в среде Хью-Лейфсона	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/+	+/–
Газ из глюкозы	–	– (+)	+(–)	–	–	+	+/–	–
Лизиндекарбоксилаза	+	+(–)	– (+)	+	+	+	+/–	– (+)
Орнитиндекарбокси лаза	+	+/–	– (+)	+	+	+	+/–	– (+)
Аргининдигидролаза	–	– (+)	+	+	+	+	–/+	+/–
Ферментация: лактозы	–	– (+)	– (+)	–	+	Х	+/–	– (+)
маннита	+	+(–)	+(–)	Х	–	–	+(–)	+(–)
арабинозы	–	– (+)	+(–)	Х	–	–	+(–)	– (+)
сахарозы	+	+(–)	+	Х	–	– (+)	+/–	–
инозита	–	– (+)	–	Х	+	–	– (+)	Х
Образование: ацетилметилкарбинола	+(–)	– (+)	+(–)	–	–	+	– (+)	Х
индола	+	+(–)	+(–)	–	–	–	+(–)	+/–
нитратредуктазы	+	+(–)	+	+	+	+(–)	+	+/–
b-галактозидазы	+	+(–)	+	Х	+	+	– (+)	Х
желатиназы	+	+(–)	+	Х	–	+	– (+)	+/–
Биолюминесценция	– (+)	– (+)	–	Х	–	+	–	–
Мол. % G+C в ДНК	57-63	40-44	39-59	58-70

Примечания: 1) – бактериостатический агент 2,4-диамино-6,7-диизопропилптериоидин;

+ – положительный результат в 90 %;

— – отрицательный результат в 90 %;

+/– – положительный и отрицательный результаты встречаются в равной степени;

+(–) или –(+) – в скобках редко наблюдается результат.

Основными признаками дифференциации биоваров холерных вибрионов являются проба с холерными диагностическими фагами классическим и эльтор, реакция агглютинации с эритроцитами цыпленка или морской свинки, тест на чувствительность к 50 ед/мл полимиксина и образование ацетилметилкарбинола в реакции Фогес-Проскауэра (табл. 15).

Дифференциальные признаки биоваров V. cholerae О1

Признаки	Биовары
V. cholerae cholerae	V. cholerae eltor
Лизабельность холерными фагами: классический	+	–
эльтор	–(+)	+/–
Агглютинация эритроцитов	–	+(–)
Чувствительность к 50 ед полимиксина	+	–(+)
Образование ацетилметилкарбинола	–	+(–)

Условные обозначения см. в таблице 14.

Холерные вибрионы являются носителями умеренных фагов с низкой литической активностью. Известны фаги, активные в отношении холерных вибрионов O1 и не O1, включая O139 серологическую группу, а также с более узким спектром литического действия, в пределах отдельных групп штаммов, например ctx + и ctx¯ холерных вибрионов.

Одним из основных факторов вирулентности (и эпидемической значимости) холерных вибрионов, определяющих тяжесть клинической картины при холере, является холерный энтеротоксин, синтез которого контролируется кластером генов ctxAB.

Понятие эпидемической значимости базируется на определении комплекса показателей:

— прямые — выявление гена холерного токсина в ПЦР и определение активности его продукции на кроликах-сосунках;

— косвенные — отсутствие гемолитической, липазной активности, поздняя ферментация маннита, высокая адгезивная активность in vitro (на модели эритроцитов).

Холерные вибрионы имеют две хромосомы: большую размером 2 960 т.п.н. и малую размером 1 070 т.п.н.. На большой хромосоме V. cholerae расположены гены патогенности: ctxAB, кодирующий биосинтез CT, гены, определяющие продукцию дополнительных холерных токсинов, гены tcpA-F, кодирующие продукцию TCP, а также гены, необходимые для репликации, транскрипции, репарации ДНК, биосинтеза клеточной стенки и O-антигена. Биосинтез O1 антигена определяет кластер генов, обозначенный как wbe. Продукция O139 антигена кодируется кластером генов, также локализованном на большой хромосоме и имеющим обозначение wbf. Выявление с помощью ПЦР генов wbe и wbf, специфичных для холерных вибрионов O1 и O139 серологических групп, позволяет определить серогруппу возбудителя холеры. На малой хромосоме, помимо генов с неустановленной функцией, локализованы структурные гены hlyA, отвечающие за синтез термолабильного гемолизина, а также остров интегронов, содержащий гены, кодирующие антибиотикоустойчивость, и участвующий в приобретении новых генов. Следует отметить, что ген hlyA присутствует в хромосоме всех штаммов V. cholerae, как способных к биосинтезу термолабильного гемолизина, так и не продуцирующих этот белок. Однако в гене hlyA холерных вибрионов классического биовара, в отличие от такового V. cholerae эльтор, имеется делеция протяженностью 11 п.н., вследствие чего продукция гемолизина вибрионами этого биовара невозможна.

Штаммы холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп, содержащие гены ctxAB и tcpA-F, вызывают холеру и являются эпидзначимыми. Эти штаммы не лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Эпидемически не значимые штаммы холерных вибрионов, не содержащие генов ctxAB и tcpA-F, лизируют эритроциты барана в пробе Грейга. Нетоксигенные (не содержащие гена холерного токсина) ctxAB варианты холерных вибрионов O1, также как и других серогрупп могут вызывать спорадические (единичные) или групповые (при общем источнике инфицирования) заболевания, не склонные к эпидемическому распространению.

Чувствительным и специфичным методом детекции ctxAB-оперона является генодиагностика на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод применяют при исследовании выделенной культуры, проб воды, испражнений больных холерой людей или сред накопления.

Наличие гена холерного токсина (ctxAB), независимо от его экспрессии, отличает токсигенные (эпидемические) от свободноживущих холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп; кроме того, в геноме токсигенных эпидемически значимых вариантов присутствует ряд генов, кодирующих синтез белка TOX T, передающего сигналы запуска синтеза холерного токсина (CT), токсинкорегулируемых пилей адгезии (TCP) и фактора колонизации (ACF). Известно, что свободноживущие атоксигенные холерные вибрионы О1 черезвычайно редко имеют tcp ген в своей хромосоме.

Токсигенные (содержащие ген холерного токсина) штаммы вызывают гибель в течение первых двух суток с типичным «синдромом холерогенности» кроликов-сосунков, зараженных 1´10 5 и 1´10 7 м.к. Штаммы холерных вибрионов, не содержащие гена холерного токсина, не вызывают гибели животных и изменений в кишечнике или обуславливают накопление в кишечнике выживших или павших животных мутной, коричневато-желтой жидкости, т.е. развитие энтеропатогенного синдрома, связанного с реализацией других факторов патогенности.

Обязательной проверке на модели кроликов-сосунков в отсутствии возможности определения гена холерного токсина подлежат следующие штаммы V. cholerae О1 и О139 серогрупп:

а) выделенные от людей:

— гемолизнегативные штаммы холерных вибрионов О139 серогруппы;

— гемолизпозитивные штаммы холерных вибрионов обеих серогрупп;

— гемолизотрицательные штаммы холерных вибрионов О1 серогруппы, атипичные по серологическим свойствам и устойчивые к фагу эльтор и ctx + ;

б) выделенные из объектов окружающей среды:

— гемолизотрицательные штаммы холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, выделенные при отсутствии эпидемических осложнений по холере.

Для полной характеристики штаммов изучают чувствительность к антибиотикам (табл. 16).

Пограничные значения диаметров зон ингибиции роста (мм) и величин МПК (мкг/мл) антибиотиков в отношении Enterobacteriaceae