Medistok » Медицина » Пирогаллоловый красный определение белка

Принцип метода основан на фотометрическом измерении оптической плотности раствора окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии молекул белка с молекулами комплекса красителя пирогаллоловый красный и молибдата натрия (Pyrogallol Red-Molybdate complex) в кислой среде. Интенсивность окраски раствора пропорциональна содержанию белка в исследуемом материале. Наличие детергентов в реактиве обеспечивает равнозначное определение белков разной природы и строения.

Реактивы . 1) 1,5 ммоль/л раствор пирогаллолового красного (ПГК): 60 мг ПГК растворяют в 100 мл метанола. Хранят при температуре 0–5 °С; 2) 50 ммоль/л сукцинатный буферный раствор pH 2,5: 5,9 г янтарной кислоты (НООС–СН2–СН2–СООН); 0,14 г оксалата натрия (Na2C2O4) и 0,5 г натрия бензоата (C6H5COONa) растворяют в 900 мл дистиллированной воды; 3) 10 ммоль/ л раствор кристаллогидрата молибдата натрия (Na2MoO4 × 2H2O): 240 мг молибдата натрия растворяют в 100 мл дистиллированной воды; 4) Рабочий реактив: к 900 мл сукцинатного буферного раствора добавляют 40 мл раствора ПГК и 4 мл раствора молибдата натрия. pH раствора устанавливают 2,5 с помощью 0,1 моль/л раствора соляной кислоты (НСl) и доводят его объем до 1 л. Реактив в таком виде готов к использованию и стабилен при хранении в защищенном от света месте и температуре 2–25 °С в течение 6 мес; 5) 0,5 г/л стандартный раствор альбумина.

Ход определения . В первую пробирку вносят 0,05 мл исследуемой мочи, во вторую пробирку — 0,05 мл стандартного раствора альбумина и в третью пробирку (контрольная проба) — 0,05 мл дистиллированной воды, затем в эти пробирки добавляют по 3 мл рабочего реактива. Содержимое пробирок перемешивают и через 10 минут фотометрируют пробу и стандарт против контрольной пробы при длине волны 596 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.

Расчет концентрации белка в исследуемой пробе мочи осуществляют по формуле:

где С — концентрация белка в исследуемой пробе мочи, г/л; Апр и Аст— экстинкция исследуемой пробы мочи и стандартного раствора альбумина, г/л; 0,5 — концентрация стандартного раствора альбумина, г/л.

  • окраска раствора (цветного комплекса) стабильна в течение одного часа;
  • прямо пропорциональная зависимость между концентрацией белка в исследуемой пробе и поглощением раствора зависит от типа фотометра;
  • при содержании белка в моче выше 3 г/л пробу разводят изотоническим раствором натрия хлорида (9 г/л) и повторяют определение. Степень разведения учитывают при определении концентрации белка.

ИНСТРУКЦИЯ

по применению набора реагентов для колориметрического определения белка в моче и спинномозговой жидкости с пирогаллоловым красным

Состав набора:

200 мл (2 х 100 мл Р + 2 х 2 мл калибратор)

500 мл (2 х 250 мл Р + 2 х 5 мл калибратор)

Принцип метода

При взаимодействии белка с пирогаллоловым красным и

молибдатом натрия образуется окрашенный комплекс,

интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации

Состав набора

Реагент (Р) — раствор пирогаллолового красного в сукцинатном

Читайте также:  Диарея у новорожденного при грудном вскармливании симптомы

буфере, готовый к использованию.

Калибраторы — калибровочные растворы белка с низкой (0,20

г/л, используется для определения микропротеинурии) и высокой

(0,50 г/л, используется для определения протеинурии)

концентрацией белка, содержащие 70% альбумина и 30%

глобулина, готовые к использованию.

Хранение набора — при температуре 2-8°С в упаковке

предприятия-изготовителя в течение всего срока годности.

Стабильность реагента и калибраторов

После вскрытия реагент стабилен 6 мес, калибраторы — 3 мес. при хранении их в плотно закрытом виде при температуре 2-8°С в защищенном от света месте.

Нормальные величины

  • моча — до 0,120 г/л (до 0,141 г/сут);
  • спинномозговая жидкость (СМЖ) — 0,150-0,450 г/л.

Пробы для анализа

Моча, негемолизированная СМЖ.

Подготовка к анализу

  1. СМЖ и мочу центрифугировать 10 мин при 2700-4000 об/мин.
  2. Для проведения анализа использовать чистые, хорошо вымытые пробирки. Тестом на пригодность пробирок для анализа является отсутствие изменения цвета реагента. Если реагент синеет без добавления пробы — результаты определения белка будут завышены; поэтому следует сначала раскапать реагент, а затем добавлять мочу.
  3. При постановке метода следует использовать новые кюветы, так как они не окрашиваются реагентом и реакционной пробой. Старые пластиковые кюветы (мутные, не прозрачные) не пригодны для измерения. Кюветы, бывшие в работе, перед использованием обработать следующим образом: выдержать 10 мин в моющем растворе (200 мл 5% раствора перекиси водорода или 1 мл моющего средства), после чего ополоснуть водопроводной и дистиллированной водой не менее 10 раз. Набор пригоден для проведения анализа на биохимических полуавтоматических и автоматических анализаторах.

Проведение анализа Длина волны: 598 (578-620) нм; длина оптического пути: 10 мм; температура: 18-25°С.

Реагент и калибратор перед проведением анализа выдержать при комнатной температуре около 30 минут.

Процедура 1 (определение протеинурии)

Пробы перемешать, выдержать 10 мин при комнатной температуре (18-25°С). Измерить оптическую плотность опытной (Е) и калибровочной (Ек) проб против контрольной (холостой) пробы. Окраска стабильна в течение 1 ч.

Сделайте, пожалуйста, заказ

Группа компаний Юнимед

(495) 734-91-31
Пн-Пт 09:00-18:00

Мы рады Вас приветствовать на сайте www.unimedao.ru!

Спасибо, что ответили на наш вопрос

26.02.2009

Куриляк О.А., к.б.н.

В норме белок выделяется с мочой в относительно небольшом количестве, обычно не более 100–150 мг/сут.

  • калибровочная кривая строится по водному раствору альбумина. Моча по своему составу очень сильно отличается от воды: рН, соли, низкомолекулярные соединения (креатинин, мочевина и др). Вследствие этого по данным Альтшулера, Ракова и Ткачева ошибка определения белка в моче может быть 3-х кратной и более! Т.е. корректные результаты определения могут быть получены только в тех случаях, когда моча имеет очень низкий удельный вес и по своему составу и рН приближается к воде;
  • более высокая чувствительность сульфосалицилового метода к альбумину в сравнении с другими белками (в то время, как было упомянуто выше, альбумин в нормальных образцах мочи составляет не более 30% от общего белка мочи);
  • если pH мочи сдвинута в щелочную сторону, происходит нейтрализация сульфосалициловой кислоты, что так же является причиной занижения результатов определения белка;
  • скорость седиментации преципитатов подвержена значительной вариации — при невысоких концентрациях белка преципитация замедлена, и ранняя остановка реакции приводит к занижению результата;
  • скорость реакции преципитации существенно зависит от перемешивания реакционной смеси. При высоких концентрациях белка активное встряхивание пробирки может приводить к образованию крупных хлопьев и их быстрому осаждению.
  1. Альтшулер Б.Ю., Раков С.С., Ткачев Г.А. // Вопр. мед. химии. – 2001. – № 4. – C.426-438.
  2. Ким Ю.В., Потехин О.Е., Токар М.И., Шибанов А.Н. // Лаб. мед. – 2003. – № 6. – C.94-98.
  3. Клиническое руководство по лабораторным тестам, под ред. Н. Тица.- М.- Юнимед-пресс.-2003.- 942 с.
  4. Козлов А.В., Слепышева В.В. Методы определения белка в моче: возможности и перспективы // Сборник трудов VII ежегод. СПб нефрол. семинара. – СПб: ТНА. – 1999. – C.17-28.
  5. Пупкова В.И., Пикалов И.В., Хрыкина Е.Н., Харьковский А.В. // Новости «Вектор-Бест». – 2003. – № 4 (30).
  6. Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ann. Clin. Biochem. – 1991. – Vol. 28 (Pt 5). – P.467-473.
  7. Clinical Laboratury Medicine. Ed. by Kenneth D. McClatchey. – 2nd ed.-2001.- 1993p.
  8. Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // Clin. Biochem. – 2000. – Vol. 33. – P.487-494.
  9. Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Composition and device for urinary protein assay and method of using the same // ПатентСША № 5326707. – 1994.
  10. Kaplan I.V., Levinson S.S. // Clin. Chem. – 1999. – Vol. 45. – P.417-419.
  11. Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. of Med. – 2003. – Vol. 70 (6). – P.535-547.
  12. Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // Clin. Chem. – 2001. – Vol. 47. – P.2183-2184.
  13. Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Article in French. – Ann. Biol. Clin. (Paris). – 1998. – Vol. 56 (6). – P.719-723.
  14. Marshall T., Williams K.M. // Clin. Chem. – 2003. – Vol. 49 (12). – P.2111-2112.
  15. Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D’Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Chim. Acta. – 2002. – Vol. 326 (1-2). – P.177-183.
  16. Ringsrud K.M., Linne J.J. Urinalysis and body fluids: A ColorText and Atlas // Mosby. – 1995. – P.52-54.
  17. Shepard M.D., Penberthy L.A. // Clin. Chem. – 1987. – Vol. 33. – P.792-795.
  18. Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Methods. – 2001. – Vol. 47. – P.197-207.
  19. Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Methods. – 2003. – Vol. 57 (1). – P.45-55.
Читайте также:  Почему поднимается давление при климаксе

Мы рады сообщить Вам, что во втором выпуске журнала «Справочник Заведующего КДЛ», Вы можете ознакомиться со статьей А.Н. Шибанова «Определение референтного интервала концентрации белка в моче»

На прошедшей неделе генеральный директор А/О Юнимед посетил один из самых популярных курортов Кавказских Минеральных вод — г. Ессентуки. Подробнее о визите Александра Николаевича читайте в нашем репортаже.

В Медицинском Университете им.И.М.Сеченова состоялась научно-практическая конференция. Помимо интереснейших докладов от ведущих специалистов, собравшихся объединил ещё один очень приятный повод. Подробности читайте в нашем репортаже.

Из этого репортажа Вы узнаете о том, почему специалисты компании Юнимед на два дня сменили место работы на клинико-диагностическую лабораторию крупнейшего стационара города Москвы, и что из этого получилось.

Цель настоящей статьи — помочь заведующим КДЛ решить задачу оптимального выбора метода диагностики протеинурии. Сложность проблемы состоит в том, что метод должен иметь большой диапазон определения концентрации белка и при этом быть максимально простым и дешевым.

Ратуете за внедрение прогрессивных методик в практику лабораторной диагностики? — Нам с Вами по пути!

Фотометры биохимические Микролаб 540 и Микролаб 600, анализатор показателей гемостаза Минилаб 704, а также набор для определения белка в моче Юни-Тест-БМ зарегистрированы в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ.

В 2009 году компания Юнимед провела ряд благотворительных акций в поддержку российских лабораторий. О том, как фирме удается реализовывать такие проекты в экономически сложный период, рассказывает специалист по товарам для анализа мочи Ирина Елькина.

27 и 28 октября 2009 года в Нижнем Новгороде состоялся научно-образовательный форум «Современные лабораторные тесты: новые технологии и клиническая значимость». Репортаж.

Сразу две крупнейшие больницы Нижнего Новгорода получили в подарок от компании Юнимед современные анализаторы мочи Uriscan PRO.

Читайте также:  Как появляется лишай на голове

Общий клинический анализ мочи является одним из наиболее часто выполняемых видов лабораторных исследований в поликлинике.

28 и 29 мая 2009 года в Москве состоялась II научно-практическая конференция «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ».

Клиническое значение протеинурии – это тема, которая уже не одно десятилетие вызывает активную дискуссию врачей разных стран. В данной статье, опубликованной в "Американском журнале семейных врачей", изложено мнение наших зарубежных коллег о проблеме диагностики протеинурии у взрослых.

Альбуминурия (albuminuria; альбумин + греч. uron моча) — выделение с мочой альбумина.

Клинические испытания набора реагентов для определения белка в моче «Юни-Тест-БМ» проводились на 4-х клинических базах.

Обратите внимание

Эрозия шейки матки 3 степени

Содержание1 Виды и стадии2 Причины возникновения и симптоматика3 Диагностика и способы лечения4 Развитие заболевания, его ...

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock detector