Medistok » Медицина » Забор крови на пцр

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это высокочувствительный метод лабораторной диагностики инфекционных болезней и генетических мутаций у человека. Его принцип заключает в обнаружении специфичных участков молекулы ДНК или РНК в исследуемой биопробе, что говорит о присутствии в ней возбудителя/искомых генов. Забор материала на пцр: что это может быть? Для исследования подходят любые биологические жидкости (кровь, моча, ликвор, сперма, сок простаты), соскобы клеток со слизистых оболочек, образцы живой ткани.

Читайте также:  Удаление папилломы на головке

Показания

Наиболее часто в клинике проводят ПЦР для диагностики вирусных инфекций и ИППП, так как выделение их возбудителей другими методами малоэффективно. Методика позволяет с высокой точностью и в короткие сроки подтвердить:

  • хламидиоз;
  • уреаплазмоз;
  • микоплазмоз;
  • инфекцию ВПЧ;
  • герпетические инфекции;
  • гонорею;
  • трихомониаз;
  • вирусные гепатиты А, В, С;
  • цитомегаловирусную инфекцию;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • краснуху;
  • грипп;
  • ротавирусную инфекцию.

Исследование назначается при наличии симптомов перечисленных заболеваний, обнаружении специфических антител к их возбудителям в крови или при прохождении профилактических осмотров (подготовка к беременности).

ПЦР проводят для подтверждения генетических заболеваний, выявления причины бесплодия, обнаружения наследственной предрасположенности к различного рода болезням. Расшифровка генетического кода человека позволяет оценить с помощью ПЦР склонность к алкоголизму, наркомании, риск развития рака, подобрать наиболее подходящие виды спорта, определить чувствительность к лекарственным веществам.

Противопоказания

Метод не имеет абсолютных противопоказаний, к относительным можно отнести ситуации, при которых невозможно без вреда для здоровья пациента забрать биологический материал. Один из возможных вариантов — острый тромбофлебит, при котором нельзя проникать в вену иглой.

Подготовка

Подготовка напрямую зависит от характера исследуемого материала:

  • Кровь сдается натощак или после легкого завтрака, желательно не принимать лекарственные препараты за 2-3 дня до процедуры. Жирная пища, медикаменты, насыщенность плазмы крови билирубином приводят к получению недостоверных результатов.
  • Сок предстательный железы у мужчин берут после 2-3 дней полового воздержания и массажа простаты.
  • Соскоб слизистой из уретры у мужчин и женщин, соскоб с шейки матки проводится после суток полового воздержания, чтобы исключить попадание в пробу микрофлоры партнера. Нельзя спринцевать влагалище до исследования – это снизит концентрацию возбудителя в половых путях.
  • Перед сбором мочи следует тщательно подмыть половые органы с мылом.

Методика проведения ПЦР

Забор материала на пцр проводится стерильным одноразовым инструментом, врач обязательно меняет перчатки перед каждым пациентом. Высокая чувствительность метода повышает риск ложноположительных результатов, если в исследуемую пробу попадает хотя бы одна вирусная или бактериальная частица от другого пациента, с рук доктора, лаборанта или из внешней среды. Большинство возбудителей ИППП паразитируют внутри клеток эпителия уретры, влагалища, шейки матки, поэтому для анализа требуется соскоб клеток со слизистой.

В арсенале врачей-гинекологов и урологов имеются одноразовые упакованные наборы для забора материала из урогенитального тракта. В них входят цитощеточка на длинной рукоятке и небольшая пластиковая пробирка, заполненная транспортной средой. Доктор вводит щеточку в уретру/цервикальный канал, несколько раз прокручивает, аккуратно вынимает и помещает в пробирку. Полученную пробу с направлением в тот же день доставляют в ПЦР-лабораторию.

Врач-лаборант внимательно маркирует полученный материал, чтобы пациент получил именно свой результат анализа. После он приступает к выделению ДНК/РНК из полученного материала при помощи реагентов, центрифугирования и сорбции. Таким образом, лаборант очищает пробу от балластных веществ и на следующий этап ПЦР отправляет только нуклеиновые кислоты (ДНК/РНК).

Нуклеиновые кислоты – это природные полимеры, то есть, соединения, состоящие из большого количества однотипных элементов (мономеров). Каждый ген вируса, бактерии или человека имеет специфический набор мономеров, что позволяет их выделять в отдельные структуры и исследовать их функцию. При делении клеток/бактерий нуклеиновая кислота удваивается, чтобы в неизменном виде распределиться по двум дочерним клеткам. Методика ПЦР – это искусственно повторенная в пробирке процедура удвоения ДНК/РНК. Исследователи выделили все необходимые для этого процесса ферменты, синтезировали их и научились с их помощью получать неограниченное число копий нуклеиновых кислот.

Второй этап ПЦР – это амплификация или копирование обнаруженной ДНК/РНК. Она не происходит, если в биопробе нет искомых генов. Для каждого гена разработаны праймеры – органические соединения, которые связываются только с определенной последовательностью мономеров на протяжении всей молекулы нуклеиновой кислоты. В норме у человека нет РНК папилломавируса или ДНК хламидий, поэтому их обнаружение методом ПЦР свидетельствует об инфекционном процессе. Амплификацию проводят в специальном приборе – термоциклере, который поддерживает температуру содержимого пробирок на уровне 37 градусов С, чем создает идеальные условия для работы ферментов. Термоциклер следит за ходом реакции и выдает полученное количество ДНК/РНК копий на монитор компьютера (функция real-time). Данный показатель позволяет рассчитать количество возбудителя в исходном материале.

Возможные осложнения

Забор материала на пцр иппп на фоне выраженного воспаления слизистых оболочек может приводить к незначительной кровоточивости. В этом случае у женщины появляются прожилки крови в отделяемом из влагалища, у мужчин слегка окрашивается моча или сперма. Описанные изменения самостоятельно проходят в течение суток и не требуют медицинской помощи.

Расшифровка результатов ПЦР

В выдаваемом заключении врач-лаборант указывает обнаружен/нет генетический материал возбудителя, при положительном результате – количество микроорганизмов в 1 мл крови. При вирусных инфекциях этот показатель называется вирусной нагрузкой, он используется для контроля терапии гепатитов В,С, ВИЧ-инфекции. Если по какой-то причине анализ не был проведен, врач-лаборант указывает ее в заключении и дает рекомендации для дальнейших действий (повторить забор материала, взять пробу из другой локализации).

Читайте также:  Лечение грибка ног березовым дегтем

Проведение ПЦР в медицинском центре «Клиника К+31»

Клиницисты и врачи-лаборанты медицинского центра «Клиника К+31» обладают богатым опытом забора материала для ПЦР и его исследования. Благодаря их грамотным и слаженным действиям наши пациенты получают максимально достоверные результаты в короткие сроки. Лаборатория центра оснащена современной техникой от ведущих мировых производителей медицинского оборудования. Тщательный контроль качества нашей лаборатории дает нам уверенность в выдаваемых заключениях. Исследование методом ПЦР – это «золотой стандарт» диагностики и контроля многих инфекционных болезней, а также способ получить ценнейшую информацию о том, как сохранить свое здоровье на долгие годы.

Гепатит C – инфицирование печени, вызванное вирусом Flaviviridae HCV, состоящим из одной или нескольких молекул РНК. Как правило, проводится ряд диагностических мероприятий для установления у пациента гепатита C. ПЦР является анализом, точно подтверждающим диагноз. Часто заключение предоставляется врачами, когда у больного уже присутствуют первые признаки заболевания.

Что такое гепатит C

Поражение печени вирусной инфекцией, передающейся через кровь или половым путем, в медицине называется гепатитом С. Возбудителем является РНК-содержащий вирус неклеточных инфекционных агентов семейства Flaviviridae. Инфекция может долго находиться в организме, никак себя не проявляя. Поэтому лишь при обнаружении микроорганизма с помощью исследования крови методом ПЦР РНК гепатит C (как диагноз) считается обоснованным.

Флавивирус не продуцируется в искусственно выращенных изолированных клетках. В процессе размножения инфекционный агент создает иммунологически отличающиеся модификации. Эти факторы мешают организму давать соответствующий защитный ответ, а у специалистов возникают трудности с разработкой действенной вакцины.

Передается вирус парентеральным способом. Для заражения необходимо его попадание в достаточном количестве непосредственно в кровь.

Какие анализы сдают при гепатите C

Вирусные патологии печени диагностируются с помощью лабораторных тестов. Клинические исследования гепатита C проводят методом изучения чужеродных и опасных для организма антигенов или белковых соединений (антител) в биоматериале пациента, в основном в крови.

  • Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод базируется на выявлении в крови антител lgM. Иммуноглобулин считается наиболее крупным и представляет собой пентамер. Он проявляется при первичном защитном ответе лимфоцитов на неизвестное чужеродное вещество.
  • Радиоиммунологический анализ (РИА) – количественное определение иммуноглобулина lgM при помощи помеченного радиоактивного изотопа йода.
  • ПЦР гепатита C – определение в биоматериале (крови) вирусной РНК. Данный анализ достоверно подтверждает диагноз.

Исследование на иммуноглобулин G не является достоверным. Его наличие в сыворотке крови может говорить не только о присутствии флавивируса, так и о другой перенесенной инфекции, имеющей такого же возбудителя.

Что определяет анализ ПЦР

Полимеразная цепня реакция (ПЦР) базируется на установлении участков ДНК, специфичных для некоторых болезнетворных микроорганизмов в образцах материала для исследований (эпителий, кровь). Анализ дает возможность определить патогенные мельчайшие организмы (вирусы) посредством выявления их РНК либо ДНК в биологическом материале.

Лабораторная процедура по выявлению антител ПЦР гепатита C проводится в 3 этапа:

  1. Выделение. Исследуемый биоматериал очищают от примесей и получают ДНК в подвижной фазе хроматографической колонки.
  2. Амплификация. Анализ проводят в приборе-термостате амплификаторе. Он с определенной цикличность нагревает и охлаждает пробирки. За одно исследование производится до 35 циклов. В результате получается достаточное количество фрагментов ДНК для выявления, идентификации и оценки возбудителя.
  3. Электрофорез. Полученные фрагменты помещают в гель с разной насыщенностью агарозы и проводят электрофорез. Полученную электрофореграмму анализируют на компьютере.

Применяют не только стандартное исследование ПЦР, но и анализ Real Time PCR. Это диагностика в реальном времени. Метод позволяет проводить качественный и количественный анализ, что дает возможность выявить формацию и динамику болезни, а также назначить терапию, направленную на ликвидацию причины происхождения патологии. Также ПЦР в реальном времени применяют для определения чистой культуры инфекционных агентов (генотипирование).

Как сдается анализ на полимеразную цепную реакцию

Для диагностики может быть использована любая биологическая жидкость человека. Биоматериалом для исследования на гепатит C обычно является кровь.

Забор образцов для диагностики проводят в процедурном кабинете. Для взятия крови используют одноразовые пробирки с веществом, угнетающим ее свертываемость. Мероприятия, сориентированные на предотвращение распространения возбудителей инфекции, помогают избежать попадания другого штамма микроорганизмов извне.

Кровь на ПЦР гепатита C сдают утром натощак. Пробу стараются сразу доставить в лабораторию. Допускается хранение биоматериала при температуре от +4 до +8 градусов Цельсия. Контейнеры маркируют и снабжают направлением. Результаты анализа можно получить через 48 часов, иногда раньше.

Виды ПЦР

Спектр применения полимеразной цепной реакции достаточно широк. Инфекционисты определяют с помощью ПЦР гепатит B, заболевания, передающиеся кровососущими насекомыми, СПИД, туберкулез. В онкологии с помощью данного метода выявляют опухолевые клетки на ранних стадиях.

Существует около четырнадцати видов анализа. Использование того или иного вида зависит от сферы применения и конечных результатов анализов. Некоторые разновидности ПЦР незаменимы там, где результат необходим в течение 20 минут.

Для диагностики гепатита C используют 3 вида полимеразной цепной реакции:

  • Качественная оценка может быть либо положительной указывающей на присутствие в организме инфекции, либо отрицательной – отсутствие флавивируса.
  • ПЦР в реальном времени (количественный анализ) – определяет количественное РНК возбудителя в МЕ/мл.
  • Генотипирование – анализ, выявляющий разновидность (генотип) вируса.

Для точного выявления и определения заболевания с последующим назначением оптимальной терапии применяют все три вида исследований.

Качественный анализ полимеразной цепной реакции

Анализ назначают в обязательном порядке всем, у кого ИФА выявил антитела к HCV. ПЦР качественный на гепатит C является стандартным тестом на чувствительность. Метод направлен лишь на обнаружение, никакого подсчета или выделения других веществ не производится.

Читайте также:  Анализ спермограммы норма

Для определения антител используют специальные тест-системы с порогом чувствительности не ниже 50 МЕ/мл. При обнаружении антител назначаются другие уточняющие анализы. При отрицательном результате дальнейшие исследования не проводятся.

В некоторых случаях ложноотрицательный результат может быть следствием некомпетентности сотрудников лаборатории или низкокачественными реагентами. Для страховки лучше пересдать анализ в другом месте.

Количественный ПЦР

Метод применяется для прямого исследования числа флавивируса за один цикл реакции. Для точного измерения используют фрагменты ДНК, применяемые для гибридизации, или флуоресцентно-меченые праймеры. Существует экономичный вариант детекции, с применением красителя SYBL Green. Красящее вещество вклинивается в небольшую бороздку ДНК и при облучении лазером окрашивается в синий цвет.

Концентрация определяется аппаратом-амплификатором в цифровом эквиваленте. В разных лабораториях показатели могут немного отличаться, поэтому их необходимо сравнивать с референтными показателями.

Количественный ПЦР гепатита C помогает подобрать оптимальную дозировку лекарственных средств и определить продолжительность терапии. Частота проведения исследования зависит от стадии заболевания, вида генотипа и назначенного курса лечения.

Определение генотипа

Вирус гепатита C имеет изменчивое генетическое строение. Многочисленные модификации не дают возможность создать вакцину, а также затрудняют терапию. Всего выявлено и зафиксировано 11 генотипов и 100 подтипов. В странах бывшего СССР у лиц, инфицированных гепатитом C, ПЦР выявляет в основном генотипы 1b и 3.

При наличии любого из генотипов может резвиться цирроз или рак печени. Поэтому так важно обнаружить вирус вовремя.

Для некоторых пациентов определенные лекарства, предназначенные для борьбы с HCV, являются токсичными. Генотипирование позволяет определить разновидность белка и назначить эффективное лекарственное средство.

В результатах анализов на типирование стоит цифра со строчной латинской буквой, указывающая на генотип вируса. В случае если HCV обнаружен, но не типируется, это означает, что у человека несвойственный для определенной географической зоны генотип.

Результаты анализа

Расшифровкой результатов занимается врач. Только данные нескольких исследований (в совокупности с анамнезом и осмотром) могут дать общую реальную картину истории болезни.

  • У здорового человека тест на качественную реакцию в биоматериале ничего не обнаруживает. Если указано значение «обнаружено» – инфицирование подтверждается, а пациент нуждается в дальнейшей диагностике с последующим лечением.
  • Определение числа возбудителей инфекции дает возможность оценивать вирусную нагрузку на организм. В норме количественного ПЦР гепатита C возбудитель не обнаруживается. Показатель до 8*10^5 расценивается как низкая нагрузка и при грамотной терапии гарантирует благоприятный исход. Более высокие значения требуют углубленного обследования и определения длительной терапии, за положительный исход которой никто не ручается.
  • Положительные результаты генотипирования указывают, какой именно генотип распознан. Отрицательный результат свидетельствует либо об отсутствии флавивируса, либо о наличии генотипа, который нехарактерен для данного региона.

На что указывает положительный анализ ПЦР

Любое серьезное заболевание требует комплексной диагностики. Положительный ПЦР гепатита C подтверждает диагноз, но прогнозы можно делать только после дополнительных лабораторных и инструментальных исследований.

Обнаружение вируса не дает полного представления о патологии. Необходимо выявить его тип и характер, определить, как он влияет на печень и другие органы. Выявление HCV на ранних стадиях часто имеет благоприятный терапевтический исход.

Отрицательный ПЦР при положительном ИФА

При наблюдении симптомов, свойственных поражениям печени, есть большая вероятность того, что инфекции уже попала в организм. Поэтому следует обратиться к гепатологу или инфекционисту. Специалист в ходе расспросов соберет анамнез и назначит необходимое обследование.

Если по результатам исследований на гепатит C ПЦР отрицательный, а иммуноферментный анализ положительный, то это говорит о наличие в крови антител к флавивирусу. Обычно так бывает, когда инфекция попала в организм в небольшом количестве, поэтому иммунитет справился с ней самостоятельно. Но такие люди все равно считаются инфицированными и обязаны проходить обследование каждые 6 месяцев. Если с такими результатами анализов человеку отказывают в бесплатном медицинском обследовании, для сохранения здоровья лучше сдать ПЦР платно, а при положительных показателях обратится к специалисту для постановки диагноза и назначения лечения.

Достоинства и недостатки метода

При установлении диагноза «гепатит C» ПЦР имеет ряд преимуществ:

  • Обнаружение возбудителя на ранних стадиях.
  • Точное определение вируса.
  • Оперативность проводимой диагностики.
  • Минимальная вероятность ошибки.
  • Высокая чувствительность.
  • Высокая стоимость анализа. Для проведения теста необходимы дорогостоящее оборудование, реагенты и высококвалифицированные медицинские сотрудники. Все вместе складывается в немалую сумму.
  • Жесткие требования к транспортировке биоматериала.

Лечение воспаления печени

Анализ ПЦР на вирус гепатита C считается основополагающим для постановки диагноза, но не окончательным. Чтобы терапия была эффективной, требуется ряд дополнительных лабораторных и инструментальных исследований. После прохождения всех диагностических мероприятий врач назначает лечение:

  • Прописывается диета №5.
  • Спиртное полностью исключается.
  • Совместный прием «Интерферона» и «Рибавирина» в течение 25 дней.
  • Курсовой прием гепапротекторов «Эссенциале», «Карсил», «Фосфоглив».
  • В особых случаях применяют дискретный плазмаферез.

Медикаменты, назначенные гепатологом, применяют регулярно, не меняя дозировку. Продолжительность приема препаратов определяется врачом после сдачи контрольных анализов. После завершения курса терапии необходимо посещать доктора каждые полгода.

ПЦР-диагностика позволяет выявить возбудителя гепатита C на ранних сроках. Это способствует эффективности терапии и недопущению перехода заболевания в такие опасные формы, как цирроз и гепатоцеллюлярная карцинома.

Обратите внимание

Эссенциале форте до или после еды

Содержание1 Содержание:2 Как правильно принимать Эссенциале® форте Н?3 Что входит в состав Эссенциале® форте Н?4 ...

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock detector